背景使用单克隆抗体的流式细胞术分析目前主要局限于细胞表面分子。细胞质或核酶、癌蛋白、细胞因子、免疫球蛋白等细胞内结构在很大程度上被排除在此类研究之外。还被排除在流式细胞术研究之外的是成熟的膜分子如 CD3 和 CD22 的细胞质定位，它们的细胞质形式是未分化白血病最可靠的谱系标记。使用 FIX&PERM® 试剂盒，细胞内抗原的流式细胞术分析变得与表面抗原研究一样容易。唯一的先决条件是有合适的抗体偶联物。大多数可用的单克隆抗体偶联物都可以与 FIX&PERM® 试剂盒一起使用，但是一些决定簇对所涉及的固定步骤敏感。必须针对每种试剂测试此固定时间和最佳固定时间。在最终解释之前，结果必须由经过认证的专业人员进行解释。用这种抗体进行的分析应与阳性和阴性对照平行。如果获得不能归因于实验室程序差异的意外结果，请联系我们。

ProductThis FIX&PERM® 细胞固定和透化试剂盒包含 2 种试剂：固定培养基（试剂 A）和透化培养基（试剂 B） ).它旨在首先用试剂 A 固定悬浮细胞，然后用试剂 B 透化细胞膜。此过程使抗体能够进入细胞内结构并使细胞的形态散射特征保持完整。具体的配方可减少背景染色并允许同时添加透化介质和荧光染料标记的抗体。 FIX&PERM® 适用于使用流式细胞术分析来自各种人类生物样本（血液、骨髓等）的正常和恶性白细胞群。在最终解释之前，必须将结果置于其他诊断测试的背景下以及经过认证的专业人员的患者临床病史。格式：4 x 5ml 小瓶固定介质（试剂 A）和 4 x 5ml 小瓶渗透介质（试剂B). FIX&PERM® 试剂设计用于所有市售流式细胞仪。对齐和补偿应根据制造商的说明进行。每个 FIX&PERM® 批次的质量取决于来自代表性捐献者的明确定义的血液样本的固定和透化以及随后的前向和侧向散射炭的比较获得的白细胞的特性，以及对几种膜和细胞质抗原的免疫染色效率

应用生物体液（血液、骨髓等）必须在无菌条件下收集。推荐使用 EDTA 或肝素抗凝。样品应在室温下储存直至使用。为获得最佳结果，样品应在 24 小时内处理和分析。含有大量非活细胞的样品可能会导致错误的结果，这种情况需要用例如细胞活力来确定细胞活力。碘化丙啶。所有生物样本都必须谨慎处理。始终将它们视为具有潜在传染性。使用适当的预防措施，如手套、实验室外套等。固定、透化和染色程序：• 对于每个待分析的样品，在 5 毫升试管中加入 50 微升全血、骨髓或单核细胞悬浮液• 加入 100 微升试剂A（固定液，室温保存和使用）• Inc在室温下孵育 15 分钟• 添加 5 毫升磷酸盐缓冲盐水并以 300 g 离心细胞 5 分钟• 去除上清液并向细胞沉淀中添加 100 µl 试剂 B（透化培养基）和 20 µl 适当的 Nordic-MUbio 单克隆抗体偶联物• 低速涡旋 1-2 秒• 在室温下孵育 15 分钟• 如上所述用磷酸盐缓冲盐水洗涤细胞• 去除上清液并将细胞重悬于鞘液中用于立即分析或将细胞重悬于 0.5 ml 1.0% 甲醛和将它们储存在 2-8°C 的黑暗环境中。在 24 小时内分析固定细胞。评论：特殊情况（稀释的骨髓样本、其他含有低可溶性蛋白的样本）可能会受益于在 FIX&PERM® 治疗之前补充血浆成分以创造一个环境，这更接近于抗凝血。为此目的，添加 IgG 制剂（例如 Beriglobulin P、ZLB推荐使用 Behring，终浓度 10mg/ml）和人血清白蛋白（例如人血清白蛋白\"Behring”20% - 输液，终浓度 40mg/ml）。

Limitations of of技术：流式细胞术只能由专业用户进行。流式细胞仪校准不当、泄漏到其他通道的荧光补偿不准确以及区域定位不正确都可能导致错误的结果。由于各种原因，红细胞裂解可能是不可能的。在这种情况下，建议在染色前通过密度梯度离心分离单核细胞 (MNC)。只要使用的程序遵守技术建议并遵守良好的实验室规范，结果将是正确且可重现的。FIX&PERM® 解决方案在可以固定和透化人类造血细胞的浓度。因此强烈建议坚持工作g 关于细胞和抗体的浓度和体积的协议。 FIX&PERM® 的特性已使用 EDTA 抗凝外周血进行了测定。

StorageFIX&PERM® 细胞固定和透化试剂盒试剂应在室温下储存和使用。不要冻结。试剂的稳定性：请参考小瓶上印刷的有效期。不建议在有效期后使用试剂。如果试剂在指定条件以外的任何条件下储存，则用户必须验证这些条件。如果形成沉淀或发生变色，请勿使用试剂。如果获得不能归因于实验室程序差异的意外结果，请联系我们。

运输条件：运输在环境温度下

注意本产品仅供研究使用，并用于体外测试，不适用于诊断或治疗涉及人类或动物的抽动程序。仅供专业用户使用。 FIX&PERM® Cell Fixation and Permeabilization Kit 试剂 A 含有甲醛，并标注：有害。甲醛是有毒的、致敏的和疑似致癌物。切勿用嘴吸取，避免接触眼睛、皮肤和衣服。建议采用正确的处理程序。作为主要规则，未满 18 岁的人不得使用本产品。必须仔细指导用户正确的工作程序、产品的危险特性和必要的安全说明。请参阅安全数据表 (SDS) 了解更多信息。根据当地法规处理产品残留物。

参考文献近期申请论文：Mestrum SGC、de Wit NCJ、Drent RJM、Hopman AHN、Ramaekers FCS、Leers MPG。增殖活性在骨髓增生性肿瘤 (MPN)、骨髓增生异常中受到干扰综合征 (MDS) 和 MDS/MPN 疾病。医学博士之间的差异S 和 MDS/MPN.Cytometry B Clin Cytom。 2021 年 5 月；100(3)：322-330。 doi：10.1002/cyto.b.21946。 Mestrum SGC、Cremers EMP、de Wit NCJ、Drent RJM、Ramaekers FCS、Hopman AHN、Leers MPG。将 Ki-67 增殖指数整合到 Ogata 评分中可提高其对低度骨髓增生异常综合征的诊断敏感性。白血病水库2022 年 2 月；113：106789。内政部：10.1016/j.leukres.2022.106789。 Mestrum SGC、Cremers EMP、de Wit NCJ、Drent RJM、Ramaekers FCS、Hopman AHN、Leers MPG。优化门控策略和支持流式细胞术数据，用于确定 Ki-67 增殖指数，用于诊断骨髓增生异常综合征。数据简介。 2022 年 2 月 22 日；41：107976。内政部：10.1016/j.dib.2022.107976。 Nies KPH、Kraaijvanger R、Lindelauf KHK、Drent RJMR、Rutten RMJ、Ramaekers FCS、Leers MPG。正常骨髓造血细胞谱系分化中增殖分数的测定。细胞计数 A. (2018) 93, 1097-1105 . doi: 10.1002/cyto.a.23564进一步阅读：- Gerna, G., Percivalle, E., Lilleri, D., Lozza, L., Fornara, C., Hahn, G., Baldanti, F. & Revello, M. G. (2005) J Gen Virol 86, 275-84.- Groeneveld, K. , te Marvelde, J. G., van den Beemd, M.W., Hooijkaas, H. & van Dongen, J. J. (1996) Leukemia 10, 1383-9.- Haranaga, S., Yamaguchi, H., Friedman, H., Izumi, S ., & Yamamoto, Y. (2001) Infect Immun 69, 7753-9.- Hegazy, A. N. & Klein, C. (2008) Leukemia 22, 2070-9.- Kappelmayer, J., Gratama, J. W., Karaszi, E ., Menendez, P., Ciudad, J., Rivas, R. & Orfao, A. (2000) J Immunol Methods 242, 53-65.- Kline, M. P., Rajkumar, S. V., Timm, M. M., Kimlinger, T. K., Haug, J. L., Lust, J. A., Greipp, P. R. & Kumar, S. (2007) Leukemia 21, 1549-60- Knapp, W., Majdic, O. & Strobl, H. (1993) Recent Results Cancer Res 131, 31 -40.- Knapp, W., Strobl, H. & Majdic, O. (1994) Cytometry 18, 187-98.- Knapp, W., Strobl, H., Scheinecker, C., Bello-Fernandez, C. & Majdic, O. (1995) Ann Hematol 70, 281-96.- Konikova, E., Glasova, M., Kusenda, J. & Babusikova, O. (1998) Neoplasma 45, 282-91.- Lanza, F., Latorraca, A., Moretti, S., Castagnari, B., Ferrari, L. & Castoldi, G. (1997) Cytometry 30 , 134-44.- Millard, I., Degrave, E., Philippe, M. & Gala, J. L. (1998) Clin Chem 44, 2320-30.- Nakase, K., Sartor, M. & Bradstock (1998)细胞计数 34, 198-202.- Pascale, F., Contreras, V., Bonneau, M., Courbet, A., Chilmonczyk, S., Bevilacqua, C., Epardaud, M., Niborski, V., Riffault, S., Balazuc, A.M., Foulon, E., Guzylack-Piriou, L., Riteau, B., Hope, J., Bertho, N., Charley, B. & Schwartz-Cornil, I. (2008) J Immunol 180, 5963-72- Pickl, W. F.、Majdic, O.、Kohl, P.、Stockl, J.、Riedl, E.、Scheinecker, C.、Bello-Fernandez, C. 和 Knapp, W. (1996) J Immunol 157, 3850-9.- Riera-Sans, L., & Behrens, A. (2007) J Immunol 178, 5690-700- Roberts, J. L., Lengi, A., Brown, S. M., Chen, M., Zhou , Y. J., O\'Shea, J. J. & Buckley, R. H. (2004) Blood 103, 2009-18- Sargent, R. L., Craig, F. E. & Swerdlow, S. H. (2009) Int J Clin Exp Pathol 2, 574-82- Scheinecker, C., Strobl, H., Fritsch, G., Csmarits, B., Krieger, O., Majdic, O. & Knapp, W. (1995) Blood 86, 4115-23.- Sedlmayr, P., Grosshaupt, B. & Muntean, W. (1996) Cytometry 23, 284-9.- Strobl, H. & Knapp, W. (2004) J Biol Regul Homeost Agents 18, 335-9.- Strobl, H., Scheinecker, C., Csmarits, B., Majdic, O. & Knapp, W. (1995) Br J Haematol 90, 774-82.- Strobl, H., Scheinecker , C., Riedl, E., Csmarits, B., Bello-Fernandez, C., Pickl, W. F., Majdic, O. & Knapp, W. (1998) J Immunol 161, 740-8.- Strobl, H. , Takimoto, M., Majdic, O., Fritsch, G., Scheinecker, C., Hocker, P. & Knapp, W. (1993) Blood 82, 2069-78.- Wang, X., Chang, X. , Facchinetti, V., Zhuang, Y. & Su, B. (2009) J Immunol 182, 3597-608-Fan J, Tang X, Wang Q, Zhang Z, Wu S, Li W, Liu S, Yao G, Chen H 和 Sun L，间充质干细胞通过半乳糖凝集素 9 介导的免疫抑制和细胞保护功能减轻实验性自身免疫性胆管炎，Stem Cell Research & Therapy 2018, https://doi.org/10.1186/s13287-018-0979-xBingyu Shi, Jingjing Qi, Genhong Yao, Ruihai Feng, Zhuoya Zhang, Dandan Wang, Chen Chen, Xiaojun Tang, Liwei Lu, Wanjun Chen 和 Lingyun Sun 间充质干细胞移植通过抑制树突状细胞产生 IL-12 来改善干燥综合征。干细胞研究与治疗，2018 https://doi.org/10.1186/s13287-018-1023Rossella Zanin, Silvia Pegoraro, Gloria Ros, Yari Ciani、Silvano Piazza、Fleur Bossi、Roberta Bulla、Cristina Zennaro、Federica Tonon、Dejan Lazarevic、Elia Stupka、Riccardo Sgarra 和 Guidalberto Manfioletti HMGA1 促进乳腺癌血管生成，支持 FOXM1 的稳定性、核定位和转录活性实验与临床癌症研究杂志卷38，文章编号：313（2019）https://doi.org/10.1186/s13046-019-1307-8Manabu Itoh，Yosuke Mukae，Takahiro Kitsuka，Kenichi Arai，Anna Nakamura，Kazuyoshi Uchihashi，Shuji Toda，Kumika Matsubayashi、Jun-ichi Oyama、Koichi Node、Daisuke Kami、Satoshi Gojo、Shigeki Morita、Takahiro Nishida、Koichi Nakayama 和 Eiji Kobayashi 开发了一种免疫缺陷猪模型，允许长期容纳人造人血管。《自然通讯》第 10 卷，文章编号：2244 (2019)https://doi.org/10.1038/s41467-019-10107-1

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本产品的安全数据表：EA_Fix 和 Perm SDS_JS07-05-19_V1EA_SDS-GAS-002-with- Sodium-Azide_V1

343.00 美元

图 1：Fl使用 GAS-002 固定和透化后对正常骨髓 (BM) 进行流式细胞仪分析，然后对乳铁蛋白和 MPO-C2 进行免疫染色。

图 2：在使用 GAS-002 固定和透化后，对白血病患者的骨髓 (BM) 进行流式细胞仪分析，然后对乳铁蛋白和 MPO-C2 进行免疫染色。

图 3：使用未分化的 Nordic-MUbio CD22-PE 偶联物进行免疫染色d B-ALL 型白血病细胞。

图 4：使用 Nordic-MUbio CD3-PE 偶联物对 T-ALL 型表面 CD3 阴性未分化白血病细胞进行免疫染色。

图 5：用 Nordic-MUbio 抗 MPO-FITC 偶联物对 AML 型未分化白血病细胞进行免疫染色。

图 6：用 GAS-002 处理的正常血液样本的前向和侧向散射模式。

图 7：对经过 GAS-002 处理的正常血样进行双标记，并对乳铁蛋白 (PE) 和 MPO-C2 (FITC) 进行免疫染色。

图 8；用 GAS-002 处理的正常血样的双重标记，并针对 CD3 (PE) 和 MPO-C2 (FITC) 进行了免疫染色。

图 9：用 GAS-002 处理并针对乳铁蛋白 (PE) 和溶菌酶 (FITC) 进行免疫染色的正常血样的双重标记。